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GelRed(10,000×water)

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DY10204 500ul 350.00
其他名称: 核酸染料;DNA染料
品牌: 笛医
CAS号:
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产品简介

GelRed是一种稳定、安全、灵敏的核酸荧光染料,通过静电及电荷相互作用结合到核酸上,可直接替代剧毒的溴化乙锭(EB),且灵敏度远高于EB,常用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA(双链DNA)、ssDNA(单链DNA)或RNA的染色。GelRed结合单链DNARNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。

经过一系列的测试,GelRed对于手套和细胞膜都是不能穿透的。在浓度远高于凝胶染色工作浓度的情况下,染料也是无细胞毒性和非诱变性的。

使用方法

GelRed可以预制到琼脂糖凝胶中,但是GelRed可能会影响到预制胶中DNA样品的迁移率和分辨率,因此推荐使用凝胶后染色法(泡染法)。在聚丙烯酰胺凝胶中不推荐使用预制凝胶的方法,最好用泡染法。GelRed染色凝胶适用于下游的应用,如克隆、连接和测序。通过苯酚/氯仿抽提和醇沉淀能够有效地将DNA中的GelRed移除。

A. 预制凝胶法

1. 常规方法准备熔化的凝胶。预制胶法不适用于聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯

酰胺凝胶请使用泡染法。

2. GelRed10,000X)原液以1:10,000比例加入到熔化的凝胶中,完全混匀。

GelRed可在加热后的凝胶冷却至45℃左右(实验时不烫手为准)时添加。

3. 倒胶,室温下凝固。

4. 按常规方法上样电泳。注:预制胶中橙色的G示踪染料和GelRed不兼容。

5. 观察染色凝胶使用标准的透照仪(302312 nm),成像使用溴化乙锭滤光器,SYBRGelStar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。

6. 未使用的含有GelRed的预制凝胶可以重新熔化做胶,为保证最佳荧光信号,酌情添加适量染料。不建议长期储存含有GelRed熔化形式的琼脂糖。含有GelRed的预制胶可以保存在4℃供下次使用。

B. 泡染法

1. 按照常规方法进行凝胶电泳。

2. 稀释 GelRed :用水将10,000X储备液稀释3300倍制成3X染色液。通常情况下50mL染色液足够染一小块凝胶。

注:染色液中含有0.1 M NaCl能增强灵敏度,但可能会促使凝胶染色出现沉淀。

3. 把凝胶放于合适的容器,如聚丙烯染色托盘中。添加足量的3X染色液至浸没凝胶。

4. 室温缓慢振荡染色30min。注:最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同略有不同。对于含3.5-10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

5. 不必脱色,必要的话可以水洗以降低背景值。

6. 使用标准的透照仪(302312 nm)观察染色凝胶,成像使用溴化乙锭滤光器,SYBR GelStar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。

7. 染色液可重复使用2-3次,室温下避光保存

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